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第一章 流式细胞分析技术原理1

第一节 流式细胞仪的组成部件和工作原理1

一、流式细胞仪的组成部件1

二、流式细胞仪的工作原理2

第二节 流式细胞分析技术的相关概念3

一、前向散射与侧向散射3

二、荧光信号3

三、流式通道4

四、流式图5

五、光谱重叠与荧光补偿6

第三节 流式细胞分析技术的基本原理7

一、阈值设定7

二、光电倍增管电压设定8

三、补偿调节9

四、门与设门10

五、分析原理11

第二章 流式细胞分析标本处理12

第一节 流式细胞分析标本来源与制备12

一、外周血标本12

二、骨髓标本13

三、实体瘤组织标本13

四、脱落细胞标本14

五、培养细胞标本14

第二节 流式细胞分析对照的设置14

一、阴性对照的设置14

二、阳性对照的设置16

三、空白对照的设置16

四、补偿对照的设置17

第三节 流式细胞分析标记抗体的选择17

一、荧光染料17

二、荧光抗体19

三、荧光抗体的选择19

四、荧光抗体滴度的选择20

第三章 流式细胞分析仪操作规程21

第一节 FACSCalibur流式细胞仪的操作规程21

一、开机21

二、校准21

三、运行软件24

四、样品检测26

五、关机29

六、仪器保养30

七、数据分析31

第二节 FACSCantoⅡ流式细胞仪的操作规程32

一、开机32

二、校准33

三、FACSCanto Clinical六色免洗淋巴细胞亚群检测及HLA-B27分析35

四、BD FACSDiva软件进行多色获取和分析38

五、关机40

六、仪器保养41

第四章 急性白血病免疫分型及应用42

第一节 急性白血病诊断及分型42

一、急性白血病的FAB分型42

二、急性白血病的MIC分型43

三、急性白血病2008版WHO分类43

第二节 正常骨髓造血细胞分化发育的抗原表达规律45

一、正常粒系细胞和单核系细胞的抗原表达规律45

二、正常红系细胞的抗原表达规律46

三、正常巨核细胞的抗原表达规律46

四、正常B淋巴细胞的抗原表达规律46

五、正常T淋巴细胞的抗原表达规律46

第三节 急性白血病免疫分型的基本原理及检测方法47

一、急性白血病免疫分型的基本原理47

二、急性白血病免疫分型的检测方法52

三、样本55

四、细胞标记55

五、流式细胞仪检测56

六、数据分析及结果解读56

七、临床意义58

第四节 急性髓系白血病的免疫表型58

一、急性髓系白血病伴重现性细胞遗传学异常58

二、急性髓系白血病（非特指）62

三、原始浆细胞样树突细胞肿瘤73

第五节 急性淋巴细胞白血病的免疫表型73

一、B淋巴母细胞白血病／淋巴瘤74

二、T淋巴母细胞白血病／淋巴瘤79

第六节 急性系列不明型白血病的免疫表型82

一、急性未分化型白血病83

二、混合表型急性白血病伴t（9;22）（q34;q11.2）；BCR-ABLl83

三、混合表型急性白血病伴t（v;11q23）；MLL重排84

四、混合表型急性白血病，B／髓，非特殊类型84

五、混合表型急性白血病，T／髓，非特殊类型84

六、NK细胞淋巴母细胞白血病／淋巴瘤85

第七节 流式细胞术检测急性白血病微小残留85

一、流式细胞术检测微小残留病的方法学特点85

二、流式细胞术检测微小残留病的方法86

三、微小残留病检测的临床应用87

第五章 淋巴细胞增殖性肿瘤的免疫分型及应用91

第一节 淋巴细胞增殖性肿瘤流式免疫分型的检测方法91

一、主要仪器91

二、主要试剂91

三、样本92

四、细胞标记92

五、流式细胞仪检测92

六、数据分析及结果解读92

第二节 成熟B细胞肿瘤93

一、2008版WHO对成熟B细胞肿瘤的分类93

二、成熟B细胞肿瘤免疫表型分析的基本思路及策略94

三、常见的成熟B细胞肿瘤的免疫表型95

第三节 成熟T/NK细胞肿瘤107

一、2008版WHO对成熟T/NK细胞肿瘤的分类107

二、成熟T/NK细胞肿瘤免疫表型分析的基本思路及策略108

三、常见的成熟T/NK细胞肿瘤的免疫表型109

第六章 多发性骨髓瘤免疫分型及应用122

第一节 多发性骨髓瘤概述及流式细胞术免疫分型的应用122

第二节 多发性骨髓瘤免疫分型125

一、多发性骨髓瘤FCM检测样本的制备125

二、多发性骨髓瘤FCM检测125

三、多发性骨髓瘤FCM免疫表型130

第三节 多发性骨髓瘤微量残留病流式细胞术检测134

一、流式细胞术检测MM微小残留病变134

二、MRD FCM检测注意事项135

三、与其他MRD检测方法的比较136

第四节 多发性骨髓瘤免疫表型流式细胞术检测结果评估137

一、浆细胞比例问题137

二、恶性浆细胞病的临床分类问题137

第七章 细胞凋亡的检测与应用140

第一节 细胞凋亡140

一、细胞凋亡概述140

二、细胞凋亡的生物学特征141

三、细胞凋亡发生过程与机制142

四、细胞凋亡研究意义144

第二节 细胞凋亡的流式细胞术检测方法144

一、活化的caspase 3检测法144

二、Annexin-V/PI或Annexin-V/7-AAD法146

三、JC-1法、Apo2.7法（线粒体跨膜电位检测法）148

四、TUNEL法（原位末端转移酶标记法）150

五、DNA含量分析法152

六、SYTO/PI双染色法154

七、细胞凋亡相关基因蛋白的流式细胞术检测155

第三节 细胞凋亡在医学研究中的应用156

一、细胞凋亡与疾病发生密切相关156

二、调节细胞凋亡治疗疾病157

第四节 细胞凋亡研究进展157

第八章 细胞免疫功能分析与应用160

第一节 淋巴细胞及其亚群分析160

一、淋巴细胞发育及其亚群分类160

二、淋巴细胞免疫表型分析162

第二节 淋巴细胞几种常见功能亚群分析165

一、辅助性T细胞和诱导性T细胞166

二、调节性T细胞170

三、细胞毒性T细胞和抑制性T细胞173

四、初始T细胞和记忆T细胞175

五、活化T细胞177

第三节 机体免疫功能监测的质量控制180

第九章 细胞因子的检测与应用181

第一节 细胞因子的基本概念与应用181

一、基本概念181

二、临床应用181

第二节 检测方法183

一、胞内染色法183

二、液相芯片技术与BD流式微球阵列分析187

三、方法学评价190

第十章 PNH阳性克隆的筛查与应用192

第一节 基于CD55和CD59分子表达的PNH筛查方法192

一、白细胞表面CD55和CD59分子的测定192

二、红细胞表面CD55和CD59分子的测定196

第二节 基于FLAER的PNH筛查方法197

第三节 流式诊断和监测PNH及相关疾病的指南199

一、PNH实验的临床指征200

二、流式细胞术检测PNH200

第十一章 HLA-B27的流式检测与应用203

第一节 概述203

第二节 HLA-B27检测方法203

一、补体依赖性微量淋巴细胞毒法（CDMA）204

二、酶联免疫测定试验（ELISA）204

三、引物特异性聚合酶链反应（SSP-PCR）205

四、流式细胞术（FCM）法205

第三节 HLA-B27检测的临床应用209

一、HLA-B27检测在AS诊断中的应用价值209

二、HLA-B27在其他脊柱关节病中的应用210

三、HLA-B27在急性葡萄膜炎中的应用210

四、HLA-B27与感染性疾病的关系210

第十二章 造血干细胞的流式分析及应用211

第一节 概述211

一、造血干细胞概念211

二、造血干细胞的生物学特性211

第二节 造血干细胞检测方法212

一、动物体内重建实验212

二、体外克隆形成实验213

三、造血干细胞表面标志测定213

第三节 造血干细胞的计数214

一、ISHAGE法检测CD34+细胞215

二、ProCOUNT造血干细胞计数217

第四节 造血干细胞的临床应用221

一、造血干细胞移植221

二、造血干细胞可作为基因治疗的靶细胞222

附录 常用溶液的配置224